客西馬尼位於耶路撒冷東邊，在汲淪谷對面（約18:1），橄欖山上或附近（路22:39）。

客西馬尼園的具體地點無法確定，因為（據約瑟夫斯記載）公元70年羅馬軍隊包圍耶路撒冷期間，城四周的所有樹木都被砍掉了。（《猶太戰記》第6卷5-8節［1章1段］）一個傳統說法認為，客西馬尼的舊址在方濟各會於1848年圈起的一個園子裡。園子的面積是46米乘43米（150英尺乘140英尺），位於橄欖山腳下，在西面斜坡上的岔口。