Nachdem Paulus und Barnabas nach Antiochia zurückgekehrt waren, gab der heilige Geist zu verstehen, dass Paulus und Barnabas für ein besonderes Werk abgesondert werden sollten. Darauf wurden die beiden ausgesandt, und sie unternahmen eine Reise, die als die erste Missionsreise des Paulus bekannt wurde (ca. 47–48 u. Z.). Bevor Paulus seine zweite Missionsreise begann und während er sich in Antiochia aufhielt, kam um das Jahr 49 u. Z. die Frage der Beschneidung der Nichtjuden auf, und der Beschluss der leitenden Körperschaft in Jerusalem wurde von Paulus und Barnabas der Versammlung in Antiochia überbracht (Apg 15:13-35). Die zweite Missionsreise des Paulus, ca. 49–52 u. Z., begann und endete ebenfalls in Antiochia, und dort wies Paulus auch den Apostel Petrus dafür zurecht, dass er ein Zugeständnis gemacht und Juden und Nichtjuden unterschiedlich behandelt hatte (Gal 2:11, 12).

Paulus besuchte sie mit Barnabas zweimal auf seiner ersten Missionsreise ca. 47–48 u. Z. und predigte dort in der Synagoge, wo er viel Interesse vorfand (Apg 13:14; 14:19-23). Doch gewisse Juden wurden wegen der großen Zuhörermengen eifersüchtig, stachelten deshalb einige der prominenten Männer und Frauen der Stadt auf und trieben Paulus und Barnabas hinaus (Apg 13:45, 50; 2Ti 3:11).